单克隆抗体制备——融合细胞的培养与筛选
1. 杂交瘤融合细胞铺板培养
1.1 96孔板液体培养
1.1.1用排枪将重悬后的细胞均匀铺入96细胞培养板，200μl/孔（若饲养细胞已提前铺好，则只需每孔加100μl即可）；
1.1.2铺好后置5% CO2，37℃培养箱培养，培养7天后，用HAT完全培养基换液一半。
1.2半固体培养基培养
1.2.1 取2%甲基纤维半固体培养基（1×1640不完全培养基+1×HAT+1%双抗+20%胎牛血清）20ml，加入20ml融合细胞和饲养细胞悬液（HAT完全培养基），再加入2ml促进杂交瘤形成添加物因子（MAC0014），充分混匀后，倒入6孔板，3ml/孔；
1.2.2 6孔板置5% CO2，37℃培养箱培养，长出白色集落，挑取白色集落至含饲养细胞的96孔板中。
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货号 |
产品名称 |
规格 |
产品描述 |
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MCC0019 |
杂交瘤半固体培养（2%甲基纤维素） |
10ml/50ml/100ml |
细胞融合半固体培养或者亚克隆。 |
2. 杂交瘤阳性细胞孔的筛选
阳性细胞孔的筛选一般采用间接ELISA法。
2.1 抗原最佳包被浓度的确定
参照“多克隆抗体制备——抗体效价的检测（ELISA）”
（在进行杂交瘤细胞检测之前必须用阳性免疫血清建立好ELISA检测方法。）
2.2 杂交瘤细胞孔的检测
按照最佳包被浓度包被ELISA板，封板后，取杂交瘤细胞细胞培养上清，加入酶标板孔，每孔100μl；孵育洗涤后，分别加入HRP标记羊抗小鼠，底物显色，读取OD值。
2.3 阳性细胞株/阳性孔的选取
选取阳性值最高的孔予以保留并进行亚克隆。
（具体该选择保留多少孔根据项目实际需求决定。