【产品名称】

通用名称：猪流感病毒（通用型）检测试剂盒（实时荧光PCR法）

英文名称：Swine Influenza Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包装规格】 25T/盒 & 50T/盒

【预期用途】

本试剂盒利用实时荧光PCR原理，定性检测猪流感病毒，对猪流感病毒引起的流感及其并发症的诊断及疗效评估有重要指导意义。

【检验原理】

本试剂盒针对猪流感病毒的高度保守区域设计特异性引物和探针，在反应体系中含猪流感病毒基因组模板的情况下，PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用荧光定量PCR仪对PCR过程中相应通道信号进行实时监测和输出，实现检测结果的定性分析。

【主要组成成份】

注：阴性对照为猪基因组DNA，阳性对照为失去活性的SIV病毒cDNA。

【储存条件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反复冻融，有效期12个月。

【适用仪器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。

【样本要求】

1.取咽喉拭子和鼻拭子，采集方法如下：

(1) 咽喉拭子，采取时要将拭子深入喉头及上颚裂来回刮3次～5次，取咽喉分泌液；

(2) 鼻拭子，将拭子深入鼻腔及周围圈沾取分泌液；

(3) 将咽喉拭子和鼻拭子一起放入有 1.0 mL 生理盐水的离心管中备用；

（4）理想情况下标本应使用头部为合成纤维的拭子，用铝或塑料做杆。不推荐棉拭子和木杆。

2.血液或血清样品：使用无菌注射液抽取样品置于离心管中待检。

3.标本采集管应包含含有蛋白稳定剂的病毒运输液。

4.应避免标本间交叉污染。

5.标本收集后可立即检测；若不能立即检测，可置于2～8℃冷藏过夜保存；如需长期保存，标本应冻存于-80℃以下，避免反复冻融。

【检验方法】

1. 试剂准备（试剂准备区）

（1）从冰箱中取出试剂盒, 从试剂盒中取出实验所需试剂，充分融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体。

（2）核算当次实验所需要的反应数（n），并根据如下表所示反应体系计算当次实验所需要的各种试剂量。

n =阴性对照数（1T）+阳性对照数（1T）+误差预留量（1T）+样本数

 (3)在无菌离心管中加入上述试剂，充分混匀后瞬时离心。按照20 μL/管分装量将试剂分装至PCR反应管。

2.样本准备（样本处理区）

用QIAGEN、Roche公司RNA提取试剂盒提取RNA，具体操作按照其试剂盒说明书操作。

3.加样

在上述制备好的PCR反应样本管中分别加入处理好的待测标本RNA各5 μl、终体积25 μl/管，盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心，转移到PCR仪器上。阴性对照和阳性对照管则各加5 μL试剂盒自带的阴性对照或阳性对照品，终体积为25 μl/管，盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心，转移到PCR仪器上。

4. PCR（PCR扩增区）

（1）取样本处理区准备好的PCR反应管，放置在实时荧光定量PCR仪样品槽相应位置，并记录放置顺序。

（2）按下表设置仪器核酸扩增相关参数进行PCR扩增。