长期以来，肺癌一直是全世界发病率和死亡率最高的癌症。近几年肿瘤免疫治疗快速发展， PD-1免疫检查点抑制剂振奋人心的临床效果为实体瘤患者重新带来崭新的希望。在肺癌，尤其是缺少特定突变，没有靶向药可用的非小细胞肺癌(NSCLC)的研究中，都会优先推荐PD-1抑制剂。PD-1抑制剂治疗效果虽好，但效率却不高。原因之一是缺乏激活的肿瘤特异性T细胞，PD-1抑制剂无法有效发挥激活T细胞作用的效应。因此PD-1/L1抑制剂和其他疗法的组合已经渐渐成为目前产业界另一个重要的发展方向，联合细胞治疗便是其中的一条途径。细胞治疗可以为患者提供大量具有肿瘤特异性的T细胞，进入到复杂的肿瘤微环境发挥强大的肿瘤杀伤效应。
肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)在转移性黑色素瘤等多个癌症患者的治疗中都取得了很好的疗效，但尚未在转移性NSCLC评估过。近期杜克大学(Duke University)和莫菲特(Moffitt)的研究人员在《Nature Medicine》发表了使用TILs联合nivolumab治疗PD-1耐药的转移性晚期NSCLC的一项单臂开放性I期临床试验的成果。
图1：临床试验研究设计示意图
在这项I期临床试验研究中，共招募了20名NSCLC患者，一半吸过烟，PD-L1表达为0%的有8人，表达＞50%的有6人，4位患者具有EGFR突变。该试验的主要终点为治疗的安全性，次要终点包括客观缓解率、缓解的持续时间以及T细胞的持久性。研究人员使用白细胞介素2扩增培养患者自体肿瘤组织来源的TILs。与此同时，患者接受了至少4个周期的PD-1单抗治疗。患者接受环磷酰胺和氟达拉滨清除淋巴细胞，给TIL腾出空间，以利于其在体内更好地定植繁衍。然后输注TIL和白细胞介素-2，随后接受nivolumab的维持治疗。在13例可评估的患者中，3例确认对治疗有反应，11例病患发现肿瘤负荷减轻。其中两名患者在1.5年持续治疗后获得完全缓解。研究人员在接受TIL治疗后的患者体内还检测到了一群能识别多种癌症突变类型的T细胞，且这群T细胞在治疗有效的患者中富集。新抗原反应性T细胞克隆在治疗后外周血增殖过程中持续存在。该研究结果表明了TIL细胞治疗转移性肺癌的安全性和有效性，提示TIL疗法可成为转移性肺癌潜在的新治疗策略。
图2：TIL临床活性与患者生存率分析
为了直接证明TIL治疗过程中，外周血的T细胞功能性，该团队使用了IsoPlexis平台对TIL治疗前后的T细胞的活性与多功能性进行评估。如图3数据比较显示了输注TIL前后，CD4+ T细胞和CD8+ T细胞的PSI， Polyfunctional Strength Index细胞多功能指数，反映了细胞同时表达多种细胞因子及其表达量，再综合分析因子数及表达量来评估细胞的多功能活性。可以明显看到CD4+ T细胞和CD8+ T的PSI细胞多功能指数在TIL输注后显著增加，进一步证实TIL疗法提高T细胞的功能性，对转移性NSCLC的有效性。IsoPlexis平台与独特的数据分析方式可以成为细胞治疗特异疗效相关的生物学指标或质量评价指标。
图3：TIL治疗前后患者T细胞PSI的情况
IsoLight全自动单细胞功能蛋白质组学分析系统
高度集成的系统，包含液体处理器、清洗站、显微镜、细胞培养装置、微阵列扫描仪的高端分析系统，单次24小时内自动化完成8个芯片的检测。
IsoCode微流控单细胞分泌蛋白组芯片
每张芯片里含有12,000个独立的亚纳升级别的微室，结合微流控技术，可以捕获500-1,500个单细胞。此外，独特的抗体编码技术可实现单细胞水平上多达32种因子的检测。
IsoSpeak多维生信分析软件
自动化生物信息分析软件，按钮式界面设计，直观易使用，结果可视化，综合性的定量指标——细胞多功能指数(PSI)，可揭示复杂的单个细胞多个因子应答的统计学数据。
参考文献
Precopio, M. L. et al. Immunization with vaccinia virus induces polyfunctional and phenotypically distinctive CD8+ T cell responses.J. Exp. Med. 204, 1405–1416 (2007)
Miltenyi Biotec
成立于2013年的IsoPlexis公司总部位于美国的康涅狄格州，是一家专注于单细胞多重功能蛋白质检测解决方案的**供应商。自2018年商业化以来，已在全球成功装机超过150台，是众多国际知名研究机构和制药厂商的合作伙伴，相关文献发布超过100篇，并有多篇高分文章发布在Nature、Cell、Immunology等刊物上。
IsoPlexis致力于提供业内广受赞誉的精准单细胞分析系统，助力加速对抗癌症及各种疑难病症的进程。通过揭示细胞亚群中独特的免疫生物标志物，推动免疫疗法及靶向治疗迈向更精准、个性化的发展阶段。
